Was ist ein ELISA?
Ein ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay) ist eine Methode, die zum quantitativen Nachweis eines Antigens in einer Probe angewendet wird. Ein Antigen ist ein Toxin oder eine Fremdsubstanz, zum Beispiel ein Grippevirus oder eine Umweltkontaminante, die das Immunsystem von Wirbeltieren dazu anregt, eine Abwehrreaktion durchzuführen. Das Spektrum an potentiellen Antigenen ist groß. Daher werden ELISAs in vielen Forschungsgebieten und Tests genutzt, um Antigene in einer großen Vielfalt von Proben nachzuweisen und zu quantifizieren. Mit ELISAs können Zelllysate, Blutproben, Lebensmittel und mehr auf bestimmte Substanzen von Interesse hin untersucht werden.
Es gibt vier Haupttypen von ELISAs: direkt, indirekt, kompetitiv und Sandwich. Jeder dieser Typen wird unten durch ein Diagramm beschrieben, das zeigt, wie die Analyte und Antikörper miteinander verbunden sind und genutzt werden.
Schritte bei der Durchführung eines Sandwich-ELISA-Assays
Die meisten Sandwich-ELISAs werden in Mikroplatten durchgeführt. Dabei dient der Boden der Vertiefung der Platte als eine feste Oberfläche, an die Antikörper und andere Reagenzien binden. Um unspezifisches Material aus den Vertiefungen herauszuwaschen, wird ein Mikroplatten-Wascher verwendet. Die Farbveränderung, die entsteht, wenn das Zielantigen anwesend ist, wird mit einem Absorptions-ELISA-Mikroplatten-Reader detektiert. Und um Standardkurven grafisch darzustellen und die Ergebnisse zu berechnen, wird eine Software für ELISA-Plattenreader genutzt.
Die untenstehende Illustration zeigt den Arbeitsablauf eines typischen Sandwich-ELISA-Assays:
Schritt 1: Fänger-Antikörper bindet an Vertiefung einer ELISA-Platte
Schritt 2: Probe zur Vertiefung hinzugeben – Das Antigen in der Probe bindet an den Fänger-Antikörper.
Schritt 3: Mikroplatte waschen – Ungebundenes Material wird weggewaschen und es bleibt nur das zu untersuchende Antigen zurück
Schritt 4: Nachweis-Antikörper hinzugeben – Der Enzym-konjugierte Nachweis-Antikörper bindet an eine zweite Stelle auf dem zu untersuchenden Antigen
Schritt 5: Mikroplatte waschen – Ungebundene Antikörper werden weggewaschen und es bleiben nur die zurück, die für das zu untersuchende Antigen spezifisch sind
Schritt 6: Substrat zugeben – Das Substrat wird durch das Enzym am Nachweis-Antikörper umgewandelt, was eine Farbveränderung erzeugt
Schritt 7: Platte messen – Der Mikroplatten-Reader weist das farbige Reaktionsprodukt nach und liefert Werte für die optische Dichte (OD)
Schritt 8: Ergebnisse berechnen – Die Menge an Antigen in jeder Probe wird berechnet und analysiert
Während ein ELISA einfach zu planen ist, ist die Assay-Durchführung zeitaufwändig und arbeitsintensiv. Die Labor-Automatisierung zur Durchführung von plattenbasierten Hochdurchsatz-Arbeitsabläufen kann dabei helfen, Zeit für andere Arbeiten freizumachen, den Durchsatz, die Effektivität und die Effizienz der Assay-Durchführung zu steigern und die Reproduzierbarkeit zu erhöhen.
ELISA-Assays und -Anwendungen
Der Enzyme-linked Immunosorbent Assay ist eine gebräuchliche Technik, die in vielen Forschungs- und Biotech-Laboren angewendet wird. Unten finden Sie eine Zusammenstellung von Application Notes, Forschung und Technologie zu wichtigen ELISA-Assays und -Anwendungen.
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Arbeitsablauf eines ELISA-Protokolls
Der Arbeitsablauf eines typischen Sandwich-ELISA-Protokolls umfasst mehrere Schritte der Hinzugabe von Reagenzien, der Inkubation und des Waschens. Hier haben wir jeden Schritt dargestellt und die Instrumente und Werkzeuge beleuchtet, die für die Durchführung des ELISA-Assays erforderlich sind, einschließlich eines Mikroplatten-Waschers, eines Absorptions-ELISA-Plattenreaders und einer Software.