Antikörper-Discovery mittels Phagen-Display

Automatisierte Lösungen zur Steigerung der Effizienz Ihres Phagen-Display-Arbeitsablaufs

Arbeitsschritte Phagen-Display

Schritt 1: Panning

Das Panning ist ein sich wiederholender Prozess zur Anreicherung von Phagen innerhalb einer Population, die im Vergleich zu anderen Phagen eine hoch-affine Bindung mit dem Zielmolekül von Interesse eingehen. Beginnen Sie damit, Ihre Phagenpopulation durch hochaffine Bindung anzureichern, indem Sie die Bibliothek dem von Ihnen ausgewählten Antigen aussetzen und dann nur diejenigen mit der höchsten Bindungsaffinität eluieren und amplifizieren.
 

Schritt 2: Kolonie-Picken 

Bakteriophagen, die im vorausgehenden Schritt selektiert wurden, werden anschließend kloniert und gepickt, um jeden individuellen proteinbindenden Phagen zu isolieren.
 

Schritt 3: Antigen-Antikörper-Interaktionen 

Während des Pannings werden Phagen, die Proteine mit höherer Bindungsaffinität präsentieren, in Relation zu Phagen selektiert, die Proteine mit einer geringeren Bindungsaffinität präsentieren. Dieser qualitative Selektionsprozess erfordert eine Validierung. Diese wird durch quantitativere Immunassays durchgeführt, mit denen die Antigen-Antikörper-Interaktion beurteilt wird. Dazu gehören ELISAs, Immunfluoreszenz, HTRF, Komplementfixierung, Agglutination und/oder Präzipitation.
 

Schritt 4: Funktionelles Screening

Im Anschluss an die Charakterisierung einer Antikörper-Antigen-Interaktion werden die Kandidatenmoleküle auf ihre funktionelle Aktivität (z. B. Virus-Neutralisation oder Impfstoffwirkung) hin gescreent, wofür oftmals zellbasierte Assays eingesetzt werden.