Coronavirus SARS-CoV-2 (COVID-19) Impfstoff-Forschung

Zellzählung / Zellviabilität

Die Bestimmung der Zellzahl und der Zellviabilität sind Grundlage in zahlreichen biologischen Experimenten, einschließlich vieler virologischer Anwendungen wie Virus-Titer und Infektiosität. Üblicherweise wird die Zellmikroskopie genutzt, um Hellfeld- und Fluoreszenzaufnahmen von Zellen zu erstellen, um diese zu zählen und um zu bestimmen, ob sie lebendig bzw. tot sind.

• Lebend/tot-Färbung (EarlyTox™ Live/Dead Assay Kit) - Messung der Überlebensfähigkeit von Zellen und von Zytotoxizität mit dem EarlyTox Zellintegritätskit
• MTT-Assay - Bestimmen Sie die Zellviabilität und Zellproliferation mit kolorimetrischen Messungen
• Transfektionseffizienz - Optimierung der GFP-Transfektion mit der SpectraMax i3 Multi-Mode Detektionsplattform
• Zellproliferation (Zellwachstum) - Erstellen von Konfluenz- und Wachstumskurven mit dem CloneSelect Imager
• Zellviabilität (CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay) - Lumineszenz-Zellüberlebensfähigkeits- und -Zytotoxizitäts-Assays auf dem SpectraMax i3x Multi-Mode Mikroplatten-Reader

Zelllinienentwicklung

Die Entwicklung von Zelllinien erfordert das Auffinden einzelner aus Zellen hervorgegangener Klone, die hohe und gleichbleibende Mengen des therapeutischen Zielproteins mit den gewünschten Qualitätsmerkmalen herstellen und mit denen ein Scale-up für eine kommerzielle GMP-Produktion möglich ist.

• Kolonie-Picken - Verbesserte Entwicklung virusspezifischer Hybridome mit den Verfahren von ClonePix und CloneSelect Imager
• Monoklonalitäts-Verifizierung - Zuverlässige Sicherstellung der Klonalität durch Verwendung von Calcein-AM mit minimalen Auswirkungen auf die Überlebensfähigkeit
• Zellsortierung - Ein Arbeitsablauf, der die Isolation von Einzelzellen und das Mikroplatten-Imaging kombiniert, verbessert die Effizienz von Klonierungen bei verstärkter Sicherstellung der Klonalität
• Zelllinien-Knock-ins/outs - Validieren Sie CRISPR-editierte Zellen mittels Imaging und Western Blot-Nachweis auf einem Mikroplatten-Reader

COVID-19 Forschungslösungen

Molecular Devices ist bestrebt, Wissenschaftler zu unterstützen, die an der zellulären Antwort auf COVID-19 und an der Impfstoffentwicklung forschen, indem wir Technologien und Lösungen liefern, die Sie schnell zum Einsatz bringen können. Wir verfügen über validierte und konforme Laborlösungen, um Ihren Forschungsbedarf zu decken, darunter Mikroplatten-Reader, Mikroplatten-Wascher und zelluläre und Biopharma-Imaging-Systeme.

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Luciferase-Assays

Luciferasen sind Enzyme, die ein Subtrat namens Luciferin zusammen mit Sauerstoff und ATP dazu verwenden, in einem energetischen Prozess Licht zu erzeugen – wie das gelbe Leuchten von Glühwürmchen. Diese Fähigkeit der Luciferase haben sich Wissenschaftler zunutze gemacht, um Reaktionen zu konzipieren, deren Lichtabgabe zur Überwachung biologischer Prozesse eingesetzt werden können, darunter die Genexpression, die biomolekulare Bindung und die Zellviabilität. Hier sind ein paar Links zu relevanten Application Notes:

• Dual-Luciferase Reporter (DLR)-Assay auf dem SpectraMax i3x Multi-Mode Microplate Reader
• Überwachen Sie die Aktivierung von NF-κB auf dem SpectraMax iD5 Microplate Reader mit einem sensitiven Dual-Reporter-Assay
• Weisen Sie die Expression der Dual-Luciferase auf dem FlexStation 3 Microplate Reader nach
• Hoch sensitiver Dual-Luciferase-Nachweis mit dem SpectraMax DuoLuc Reporter Assay-Kit

Bindungsaffinität von Proteinen / Antigenen

Die Bindungsaffinität ist ein Maß dafür, wie stark zwei Moleküle (meist ein Antikörper/Antigen-Paar) miteinander interagieren. Es wurden viele verschiedene Arten von Assays entwickelt, um die Bindungsaffinität zu bestimmen. Dies geht auf die erhebliche Heterogenität zwischen Proteinen zurück, die durch deren Größe, Lokalisation, Löslichkeit und viele andere Merkmale gegeben ist.

Erfahren Sie mehr über die gebräuchlichen Anwendungen für die Protein/Antigen-Bindungsaffinität:

• ELISA (IgG / IgM) - Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)
• Zellbasierte Bindung - Steigern Sie die Empfindlichkeit von Assays ohne Wäsche mit konfokalem Imaging
• HTRF- HTRF-Profiling-Service auf dem SpectraMax iD5 Multi-Mode Microplate Reader
• AlphaScreen / AlphaLisa - AlphaLISA Screen auf der SpectraMax Paradigm Multi-Mode Mikroplatten-Detektionsplattform

Quantifizierung von Proteinen und Nukleinsäuren (unspezifisch)

Experimentelle Protokolle bringen ein erhebliches Maß an Assay- / Probenvorbereitung mit sich. Sie verlängern die Zeitpläne jedoch auch, um die Qualität sicherzustellen. Ein Gleichgewicht zwischen dem Bedarf an Schnelligkeit und der Notwendigkeit der Qualitätssicherung zu finden, kann durch unspezifische Quantifizierungsmethoden erreicht werden. Gesamtmengen von Proteinen und/oder Nukleinsäuren können auf einem Mikroplatten-Reader mittels UV-Absorption vermessen werden.

• Kolorimetrische Protein-Assays (BCA- / Bradford-Assays) - Messen Sie Gesamtprotein in Zelllysaten mit dem SpectraMax ABS Plus Microplate Reader
• Proteinquantifizierung (mittels UV-Absorption) - Unmittelbare Proteinquantifizierung mit der SpectraDrop Mikrovolumen-Mikroplatte
• DNA- / RNA-Quantifizierung (mittels UV-Absorption) - DNA- und RNA-Absorptionsmessungen mit SpectraMax Mikroplatten-Readern
• Fluoreszenzbasierte DNA-Quantifizierung - Quantifizierung von dsDNA-Proben mithilfe der SpectraMax Quant dsDNA Assay-Kits

Quantifizierung von Proteinen und Nukleinsäuren (spezifisch)

Viele biologische Experimente haben zum Ziel, die Proteinexpression innerhalb einer Zelle durch Genmanipulation oder Wirkstoffbehandlung zu verändern. Um die Auswirkungen solcher Manipulationen verstehen zu können, ist es entscheidend, die Antwort bestimmter Proteine zu bestimmen. Antikörper werden zu diesem Zweck häufig in Bioassays (Immunoassays) eingesetzt, da sie die inhärente Fähigkeit besitzen, spezifisch an ein Protein von Interesse zu binden.

• ELISA (Zytokinsekretion) - Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)
• Western Blot - Western Blot
• HTRF (Zytokinsekretion) - HTRF-Zytokin-Assays zur Überlebensfähigkeit von Zellen normalisieren
• AlphaScreen / AlphaLisa - AlphaLISA Screen auf der SpectraMax Paradigm Multi-Mode Mikroplatten-Detektionsplattform
• ValitaTITER (IgG-Quantifizierung mittels Fluoreszenzpolarisation) - Arbeitsablauf zur Messung von IgG in der Zelllinien-Entwicklung optimieren

Arbeitsabläufe Impfstoffentwicklung

Arbeitsabläufe in der Impfstoffentwicklung unterscheiden sich in Abhängigkeit von der gewählten Plattform (z. B. inaktivierter Virus vs. DNA-Impfstoff), wobei jeder seine eigenen Vorteile bietet. Hier haben wir eine Vielfalt von Arbeitsabläufen rund um Viren adressiert – von der Antikörper-Discovery bis hin zur Entwicklung stabiler Zelllinien.

• Arbeitsablauf Antigen- / Immunogen-Discovery
• Antikörper-Discovery – Arbeitsabauf Phagen-Display
• Antikörper-Discovery – Arbeitsablauf Hybridom-Screening
• Arbeitsablauf stabile Zelllinie

Virus-Neutralisation

Die Wirksamkeit von Impfstoffen und antiviralen Wirkstoffen werden durch deren Fähigkeit bestimmt, das Eindringen von Viren in Zellen (Infektion), die in Kultur wachsen, zu inhibieren.

• Plaque-Reduktions-Neutralisations-Assay (PRNT)
• Virus-Reduktions-Neutralisations-Assay (VRNT) - Virus Reduction Neutralization Test: A Single-Cell Imaging High-Throughput Virus Neutralization Assay for Dengue
• Mikroneutralisation    Development of a High-Throughput Respiratory Syncytial Virus Fluorescent Focus-Based Microneutralization Assay

Entstehung viraler Erkrankungen (virale Signalwege)

Für die Entwicklung wirksamer Behandlungen gegen Infektionskrankheiten ist das Verständnis der grundlegenden Mechanismen des Eindringens, der Replikation, der Ausscheidung etc. von Viren wesentlich. Die Fluoreszenzmikroskopie ist ein elementares Werkzeug in jedem Virologie-Labor, weil es die Visualisierung viraler Signalwege bei hohen Auflösungen und über die Zeit ermöglicht. Zellsignal-Assays und Reportergen-Assays können angewendet werden, um die zellulären Signalwege, die durch Viren betroffen sind, zu untersuchen. Durchgeführt werden sie mit Mikroplatten-Readern.

• Internalisierung - Visualisieren Sie subzelluläre Vesikel zur Quantifizierung der Autophagie in neuronalen Zellen
• Reportergen-Assays - Messung der Luciferase-Expression mit dem SpectraMax Glo Steady-Luc Reporter Assay-Kit
• Zellsignale (GPCR) - Komplette Lösung für den cAMP-Arbeitsablauf mit dem CatchPoint cAMP-Fluoreszenz-Assay-Kit

Virus-Titer

Viren infizieren Zellen, um zu replizieren, da sie diese Aufgabe nicht selbst bewerkstelligen können. Die Virusmenge in einer zellfreien Probe zu messen liefert keine Informationen in Bezug auf die Infektiosität des Virus, und der Nutzen ist dadurch beschränkt. Stattdessen wird das Zell-Imaging angewendet, um die Fähigkeit eines vorliegenden Virus, Zellen in Kultur zu infizieren, nachzuweisen. Die Viruskonzentrationen werden anhand des Anteils infizierter Zellen bestimmt.

• Plaque-Assay - Die Universität Zürich verwendet das ImageXpress Widefield System, um Wirt-Pathogen-Interaktionen zu untersuchen
• Focus-Forming-Assay
• Endpunkt-Verdünnung