ClonePix 2 Säugerzelllinie-Kolonie Picker

Antigenspezifisches Screening

Antikörper-Discovery bezieht sich in der Regel auf das Screening und die Identifizierung spezifischer Antikörper, die zum Zweck der Diagnose und Behandlung von Erkrankungen an ein Zielantigen-Molekül binden. Die Spezifität des Antikörpers basiert auf seiner Fähigkeit, das Epitop, einen einzigartigen Bereich auf einem Antigenmolekül, zu binden. Therapeutische Antikörper sind typischerweise monoklonal, wurden aus einzelnen Zellen gewonnen und sind gegen eine einzige Epitopregion auf dem Antigen gerichtet. Das ClonePix 2 System automatisiert das Screening und das schnelle Auffinden von Antigen-spezifischen Klonen in einer heterogenen Population von Zellen.

Zelllinienentwicklung

Die Entwicklung von Zelllinien ist ein wesentlicher Schritt im Prozess der Erzeugung biopharmazeutischer Moleküle wie z. B. monoklonaler Antikörper. Der Prozess beginnt meistens mit der Transfektion des Wirtszelltyps mit DNA, die das therapeutische Protein von Interesse kodiert. Eine zufällige oder gezielte Integration der Ziel-DNA in das Genom der Wirtszelle wird so ermöglicht. Tausende von Klonen werden überprüft, um dann die wenigen zu isolieren, die große Mengen produzieren – ein manueller und zeitaufwendiger Prozess.

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Screening auf Zelloberflächenexpression

Viele Proteine, die auf der Oberfläche von Zellen exprimiert werden, sind Zielmoleküle bei der Entdeckung und Entwicklung von Biopharmazeutika. Die G-Protein-gekoppelten Rezeptoren (GPCR) bilden zum Beispiel die größte Klasse von Zelloberflächen-Proteinen und sind Zielantigene für fast 40 % der bereits existierenden Wirkstoffe. Das Auffinden und die Auswahl von hochwertigen Zelloberflächen-Klonen in einem transfizierten Pool von Zellen kann eine Herausforderung sein. Das ClonePix 2 System stellt eine automatisierte Methode zum Screening großer Zellpopulationen dar, das die Wahrscheinlichkeit erhöht, einen seltenen, mit hoher Affinität bindenden oder einen hoch produktiven Klon zu finden.

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Screening auf Produktivität von Klonen und Titer

Eine wichtige Komponente in der Identifizierung hochwertiger Klone ist die Bestimmung der Produktivität der aus einer einzigen Zelle gewonnenen Kolonie. Das Screening auf Produktivität mit traditionellen Ansätzen ist arbeits- und zeitintensiv. Allgemein besteht der Prozess aus mehreren Schritten, darunter die Isolation einzelner Zellen aus limitierenden Verdünnungsreihen, gefolgt von der Bestimmung des Titers mittels ELISA. Das ClonePix 2 System kombiniert die Isolierung einzelner Zellen und das Screening der Produktivität in einem einzigen Schritt, was zu einer drastischen Verkürzung der Screeningzeit und einer größeren Anzahl von Kandidaten führt. Andererseits bieten die High-Throughput Octet-Systeme eine Methode zur schnellen Titerbestimmung, die die Screeningzeit ebenfalls drastisch verkürzt.

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Hybridoma-Screening

Antikörper-Discovery bezieht sich in der Regel auf das Screening und die Identifizierung von monoklonalen Antikörpern (mAbs), die zur Diagnose und Behandlung von Krankheiten gegen ein spezifisches Epitop gerichtet sind. Ein gängiger Ansatz bei der Generierung von monoklonalen Antikörpern umfasst die Fusion prämitotischer Krebszellen mit postmitotischen und terminal differenzierten Antikörper-exprimierenden B-Zellen aus der Milz. Die daraus resultierende fusionierte Zelle wird Hybridoma genannt und bietet die Vorteile, mAbs zu produzieren und sich gleichzeitig durch Teilung selbst zu erneuern. Das Screening von Hybridomas auf ihre Bindespezifität oder Produktivität kann mit dem ClonePix 2 System automatisiert werden.

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Sicherstellung der Monoklonalität

Die Entwicklung von Zelllinien und die Sicherstellung der Monoklonalität sind entscheidende Schritte im Herstellungsprozess biopharmazeutischer Moleküle, wie z. B. monoklonaler Antikörpern. Eine Zelllinie kann nach der Isolierung einer einzigen überlebensfähigen Zelle, die das Protein von Interesse robust exprimiert, etabliert werden. Ein entscheidender Meilenstein in diesem Prozess ist die Dokumentation des Nachweises der Klonalität. Die Dokumentation der Klonalität basiert üblicherweise auf Abbildungen, wobei eine Aufnahme einer einzelnen Zelle erstellt und in die Zulassungsunterlagen mit aufgenommen wird.

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