Zelllinienentwicklung
Stabile Zelllinien werden häufig für wichtige Anwendungen verwendet, beispielsweise die Herstellung von Biologika (z. B. rekombinante Proteine und monoklonale Antikörper), zum Wirkstoff-Screening und für Genfunktionsstudien. Am Anfang des Prozesses zur Entwicklung stabiler Zelllinien steht häufig die Transfektion ausgewählter Wirtszellen, in der Regel CHO- oder HEK-293-Zellen, mit den gewünschten Plasmiden. Nach der Transfektion werden sodann hochexprimierende Klone gescreent und quantifiziert. Sobald diese hochproduktiven Zelllinien identifiziert sind, werden diese Zelllinien und/oder die von diesen Zellen produzierten Proteine validiert. Die traditionell für die Zelllinienentwicklung verwendeten manuellen Screeningmethoden sind zeit- und arbeitsintensiv. Daher besteht eine große Nachfrage nach automatisierten High-Throughput-Lösungen für solche Vorgänge.
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Screening auf Zelloberflächenexpression
Viele Proteine, die auf der Oberfläche von Zellen exprimiert werden, sind Zielmoleküle bei der Entdeckung und Entwicklung von Biopharmazeutika. Die G-Protein-gekoppelten Rezeptoren (GPCR) bilden zum Beispiel die größte Klasse von Zelloberflächen-Proteinen und sind Zielantigene für fast 40 % der bereits existierenden Wirkstoffe. Das Auffinden und die Auswahl von hochwertigen Zelloberflächen-Klonen in einem transfizierten Pool von Zellen kann eine Herausforderung sein. Das ClonePix 2 System stellt eine automatisierte Methode zum Screening großer Zellpopulationen dar, das die Wahrscheinlichkeit erhöht, einen seltenen, mit hoher Affinität bindenden oder einen hoch produktiven Klon zu finden.
Screening auf Zelloberflächenexpression
Viele Proteine, die auf der Oberfläche von Zellen exprimiert werden, sind Zielmoleküle bei der Entdeckung und Entwicklung von Biopharmazeutika. Die G-Protein-gekoppelten Rezeptoren (GPCR) bilden zum Beispiel die größte Klasse von Zelloberflächen-Proteinen und sind Zielantigene für fast 40 % der bereits existierenden Wirkstoffe. Das Auffinden und die Auswahl von hochwertigen Zelloberflächen-Klonen in einem transfizierten Pool von Zellen kann eine Herausforderung sein. Das ClonePix 2 System stellt eine automatisierte Methode zum Screening großer Zellpopulationen dar, das die Wahrscheinlichkeit erhöht, einen seltenen, mit hoher Affinität bindenden oder einen hoch produktiven Klon zu finden.
Zellüberlebensfähigkeit
Die Entwicklung von Zelllinien erfordert das Auffinden einzelner aus Zellen hervorgegangener Klone, die hohe und gleichbleibende Mengen des therapeutischen Zielproteins herstellen. Ein wesentlicher erster Schritt in diesem Prozess ist die Isolierung einzelner, überlebensfähiger Zellen. Einzelzellen proliferieren, um Kolonien zu bilden, die dann danach bewertet werden können, wie produktiv sie das therapeutische Zielprotein herstellen. Die Überlebensfähigkeit und die Wachstumsraten von Klonen, die aus einzelnen Zellen hervorgegangen sind, können mit dem CloneSelect Imager bestimmt werden.
Zellüberlebensfähigkeit
Die Entwicklung von Zelllinien erfordert das Auffinden einzelner aus Zellen hervorgegangener Klone, die hohe und gleichbleibende Mengen des therapeutischen Zielproteins herstellen. Ein wesentlicher erster Schritt in diesem Prozess ist die Isolierung einzelner, überlebensfähiger Zellen. Einzelzellen proliferieren, um Kolonien zu bilden, die dann danach bewertet werden können, wie produktiv sie das therapeutische Zielprotein herstellen. Die Überlebensfähigkeit und die Wachstumsraten von Klonen, die aus einzelnen Zellen hervorgegangen sind, können mit dem CloneSelect Imager bestimmt werden.
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Screening auf Produktivität von Klonen und Titer
Eine wichtige Komponente in der Identifizierung hochwertiger Klone ist die Bestimmung der Produktivität der aus einer einzigen Zelle gewonnenen Kolonie. Das Screening auf Produktivität mit traditionellen Ansätzen ist arbeits- und zeitintensiv. Allgemein besteht der Prozess aus mehreren Schritten, darunter die Isolation einzelner Zellen aus limitierenden Verdünnungsreihen, gefolgt von der Bestimmung des Titers mittels ELISA. Das ClonePix 2 System kombiniert die Isolierung einzelner Zellen und das Screening der Produktivität in einem einzigen Schritt, was zu einer drastischen Verkürzung der Screeningzeit und einer größeren Anzahl von Kandidaten führt. Andererseits bieten die High-Throughput Octet-Systeme eine Methode zur schnellen Titerbestimmung, die die Screeningzeit ebenfalls drastisch verkürzt.
Screening auf Produktivität von Klonen und Titer
Eine wichtige Komponente in der Identifizierung hochwertiger Klone ist die Bestimmung der Produktivität der aus einer einzigen Zelle gewonnenen Kolonie. Das Screening auf Produktivität mit traditionellen Ansätzen ist arbeits- und zeitintensiv. Allgemein besteht der Prozess aus mehreren Schritten, darunter die Isolation einzelner Zellen aus limitierenden Verdünnungsreihen, gefolgt von der Bestimmung des Titers mittels ELISA. Das ClonePix 2 System kombiniert die Isolierung einzelner Zellen und das Screening der Produktivität in einem einzigen Schritt, was zu einer drastischen Verkürzung der Screeningzeit und einer größeren Anzahl von Kandidaten führt. Andererseits bieten die High-Throughput Octet-Systeme eine Methode zur schnellen Titerbestimmung, die die Screeningzeit ebenfalls drastisch verkürzt.
Glykosylierungs-Profiling
Die Glykosylierung ist eine wichtige post-translationale Modifikation während der Herstellung der Wirkstoffmoleküle von Biologika. Sie wirkt sich of signifikant auf die Leistung und Variabilität des Produkts aus. Sie kann sowohl die Sicherheit als auch die Wirksamkeit der Biologikamoleküle beeinträchtigen und sollte deshalb während des Screenings und der Selektion dieser Biologika kontrolliert werden.
Glykosylierungs-Profiling
Die Glykosylierung ist eine wichtige post-translationale Modifikation während der Herstellung der Wirkstoffmoleküle von Biologika. Sie wirkt sich of signifikant auf die Leistung und Variabilität des Produkts aus. Sie kann sowohl die Sicherheit als auch die Wirksamkeit der Biologikamoleküle beeinträchtigen und sollte deshalb während des Screenings und der Selektion dieser Biologika kontrolliert werden.
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Sicherstellung der Monoklonalität
Die Entwicklung von Zelllinien und die Sicherstellung der Monoklonalität sind entscheidende Schritte im Herstellungsprozess biopharmazeutischer Moleküle, wie z. B. monoklonaler Antikörpern. Eine Zelllinie kann nach der Isolierung einer einzigen überlebensfähigen Zelle, die das Protein von Interesse robust exprimiert, etabliert werden. Ein entscheidender Meilenstein in diesem Prozess ist die Dokumentation des Nachweises der Klonalität. Die Dokumentation der Klonalität basiert üblicherweise auf Abbildungen, wobei eine Aufnahme einer einzelnen Zelle erstellt und in die Zulassungsunterlagen mit aufgenommen wird.
Sicherstellung der Monoklonalität
Die Entwicklung von Zelllinien und die Sicherstellung der Monoklonalität sind entscheidende Schritte im Herstellungsprozess biopharmazeutischer Moleküle, wie z. B. monoklonaler Antikörpern. Eine Zelllinie kann nach der Isolierung einer einzigen überlebensfähigen Zelle, die das Protein von Interesse robust exprimiert, etabliert werden. Ein entscheidender Meilenstein in diesem Prozess ist die Dokumentation des Nachweises der Klonalität. Die Dokumentation der Klonalität basiert üblicherweise auf Abbildungen, wobei eine Aufnahme einer einzelnen Zelle erstellt und in die Zulassungsunterlagen mit aufgenommen wird.
Einzelzellsortierung
Die Entwicklung von Zelllinien erfordert das Auffinden einzelner aus Zellen hervorgegangener Klone, die hohe und gleichbleibende Mengen des therapeutischen Zielproteins herstellen. Der erste Schritt in diesem Prozess ist die Isolierung einzelner, überlebensfähiger Zellen. Die limitierende Verdünnungsreihe ist eine Technik, die sich auf statistische Wahrscheinlichkeit stützt, jedoch zeitraubend ist. Der CloneSelect Single-Cell Printer ermöglicht eine schonende Isolierung von Zellen auf eine Art und Weise, die die Überlebensfähigkeit von Zellen maximiert, und dabei auch einen direkten Nachweis der Klonalität durch eine Serie von fünf Bildern, die während des Absetzens der Zellen aufgenommen werden, bietet.
Einzelzellsortierung
Die Entwicklung von Zelllinien erfordert das Auffinden einzelner aus Zellen hervorgegangener Klone, die hohe und gleichbleibende Mengen des therapeutischen Zielproteins herstellen. Der erste Schritt in diesem Prozess ist die Isolierung einzelner, überlebensfähiger Zellen. Die limitierende Verdünnungsreihe ist eine Technik, die sich auf statistische Wahrscheinlichkeit stützt, jedoch zeitraubend ist. Der CloneSelect Single-Cell Printer ermöglicht eine schonende Isolierung von Zellen auf eine Art und Weise, die die Überlebensfähigkeit von Zellen maximiert, und dabei auch einen direkten Nachweis der Klonalität durch eine Serie von fünf Bildern, die während des Absetzens der Zellen aufgenommen werden, bietet.
Ressourcen für die Zelllinienentwicklung
Broschüre
CloneSelect Single-Cell Printer Serie
CloneSelect Single-Cell Printer Series
Die CloneSelect™ Single-Cell Printer™ Serie setzt einzelne Zellen mittels einer patentierten, Tintendrucker-artigen wegwerfbaren Einwegkartusche schonend und mit großer Effizienz ab.
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Broschüre
Monoklonalität-Berichtsfunktion des CloneSelect™ Imager
CloneSelect Imager Monoclonality Report Feature
Den Bildnachweis für die Monoklonalität innerhalb des Entwicklungsprozesses der Zellline zu erbringen ist nicht so einfach, wie das Bild einer einzelnen Zelle zu exportieren. So sollten zum Beispiel hochauflösende Bilder der gesamten Vertiefung …
E-Book
Selektion hochwertiger Zelllinien wie ein Profi
Select High-Value Cell Line Like a Pro
Beschleunigen Sie die Entwicklung von Zelllinien für rekombinante Proteine und die Produktion monoklonaler Antikörper
Application Note
Schnelle automatische Selektion von Säugerzelllinienkolonien nach Proteinexpression an der Zelloberfläche
Rapid automated selection of mammalian cell colonies by cell surface protein expression
Die Fähigkeit, Zellen aufgrund ihrer Oberflächenexpression von Proteinen auszuwählen, ist bei der Etablierung der Zelllinien, die den (die) Rezeptor(en) von Interesse exprimieren, von großem Nutzen für das nachfolgende Phänotypisieren / Genotypisieren …