Zelllinienentwicklung

Screening auf Zelloberflächenexpression

Viele Proteine, die auf der Oberfläche von Zellen exprimiert werden, sind Zielmoleküle bei der Entdeckung und Entwicklung von Biopharmazeutika. Die G-Protein-gekoppelten Rezeptoren (GPCRs) bilden zum Beispiel die größte Klasse von Zelloberflächen-Proteinen und sind Zielantigene für fast 40 % der bereits existierenden Wirkstoffe. Hochwertige Klone mit einer verstärkten GPCR-Expression an der Zelloberfläche in einem Pool aus transfizierten Zellen zu finden und zu selektieren kann eine Herausforderung sein. Das ClonePix 2 System stellt eine automatisierte Methode zum Screening großer Zellpopulationen dar, das die Wahrscheinlichkeit erhöht, einen seltenen, mit hoher Affinität bindenden oder einen hoch produktiven Klon zu finden.

• Schnelle automatische Selektion von Säugerzelllinienkolonien nach Proteinexpression an der Zelloberfläche
• Schnelle Selektion und Entwicklung GPCR exprimierender Säugerzelllinien mit dem neuartigen ClonePix Verfahren
• Schnelle und effiziente Selektion hoch produktiver Säugerzelllinien, die Nicht-mAb-Proteine sezernieren

Zellüberlebensfähigkeit

Die Entwicklung von Zelllinien erfordert das Auffinden einzelner aus Zellen hervorgegangener Klone, die hohe und gleichbleibende Mengen des therapeutischen Zielproteins herstellen. Ein wesentlicher erster Schritt in diesem Prozess ist die Isolierung einzelner, überlebensfähiger Zellen. Einzelzellen proliferieren, um Kolonien zu bilden, die dann danach bewertet werden können, wie produktiv sie das therapeutische Zielprotein herstellen. Die Überlebensfähigkeit und die Wachstumsraten von Klonen, die aus einzelnen Zellen hervorgegangen sind, können mit dem CloneSelect Imager und dem SpectraMax i3x Mikroplatten-Reader und Imaging Cytometer bestimmt werden.

• Erstellen von Konfluenz- und Wachstumskurven mit dem CloneSelect Imager
• Messung der Überlebensfähigkeit von Zellen und von Zytotoxizität mit dem EarlyTox Zellintegritätskit
• Lumineszente Assays für Zellviabilität und Zytotoxizität
• Broschüre: SpectraMax i3x

Screening auf Produktivität von Klonen und Titer

Eine wichtige Komponente in der Identifizierung hochwertiger Klone ist die Bestimmung der Produktivität der aus einer einzigen Zelle gewonnenen Kolonie. Das Screening auf Produktivität mit traditionellen Ansätzen ist arbeits- und zeitintensiv. Allgemein besteht der Prozess aus mehreren Schritten, darunter die Isolation einzelner Zellen aus limitierenden Verdünnungsreihen, gefolgt von der Bestimmung des Titers mittels ELISA. Das ClonePix 2 System vereinigt die Selektion von Phänotypen, die Isolation von Einzelzellen und das Produktivität-Screening in einem einzigen Schritt, wodurch erheblich kürzere Screening-Zeiten und eine höhere Anzahl an Kandidaten erzielt werden.

• Schnelles Screening und Selektion hochproduktiver stabiler Klone
• Automatisierte Optimierung der IgG-Produktion in CHO-Zellen
• Verbesserte Entwicklung von Virus-spezifischen Hybridomazellen

Kolonie-Picken

Das Picken von Kolonien ist in der biologischen Forschung ein wesentlicher Schritt, da Forscher häufig mikrobielle Klone isolieren müssen, um DNA oder Proteine in Massenproduktion herzustellen, die downstream in einer Vielzahl von Anwendungen eingesetzt werden können. Traditionell wird das Picken mikrobieller Kolonien manuell mit sterilen Pipettenspitzen oder Impfösen durchgeführt. Dies ist ein langsamer, arbeitsintensiver und zeitaufwendiger Prozess. Kolonien von Säugetierzellen werden in der Regel mit arbeitsintensiven Verfahren wie der limitierenden Verdünnungsreihe selektiert, die sich negativ auf den Auswuchs der Zellen auswirken können. Automatisierte Kolonie-Picker beschleunigen den ganzen Prozess nicht nur, die Ergebnisse sind zudem auch einheitlicher und reproduzierbarer.

Erfahren Sie mehr über unsere automatisierten Kolonie-Picker:

• Der QPix® Microbial Colony Picker nutzt eine branchenführende Kolonie-Picking-Technologie, um Engpässe zu beseitigen und umfangreiche genetische Bibliotheken schnell, präzise und effizient zu screenen. Mehr erfahren 
• Der ClonePix® 2 Mammalian Colony Picker ist ein voll automatisiertes System zur Auswahl von hochwertigen Klonen in der Antikörper-Discovery und der Zelllinien-Entwicklung. Screenen Sie mehr Klone in weniger Zeit – mit der Verifizierung monoklonaler Zellen an Tag Null. Dann screenen Sie auf die am stärksten produzierenden Klone und finden diese innerhalb von Wochen – nicht Monaten. Mehr erfahren 

Vergleich traditioneller Klonierungsmethoden mit f.sight

Da die Vorschriften für die Zelllinienentwicklung zunehmend strenger werden, müssen Forscher Einzelzellklonierungen durchführen und Beweise liefern, dass eine Zelllinie von einer einzigen Zelle abstammt (Nachweis der Klonalität). In dieser Studie haben wir sechs Sets an Experimenten durchgeführt, um einen Arbeitsablauf zu etablieren, der den CloneSelect Single-Cell Printer f.sight und den CloneSelect Imager kombiniert und in einer einzigen Klonierungsrunde eine hohe Monoklonalität sicherstellt. Zudem haben wir mithilfe zweier suspendierter CHO-Zelllinien die Klonierungseffizienz des CloneSelect Single-Cell Printer f.sight mit zwei anderen akzeptierten traditionellen Klonierungsmethoden, der Durchflusszytometrie und der limitierenden Verdünnungsreihe, verglichen.

• Vergleich traditioneller Klonierungsmethoden mit dem CloneSelect Single-Cell Printer f.sight unter Verwendung von CHO-Zelllinien, die bei der Herstellung monoklonaler Antikörper gebräuchlich sind

COVID-19-Forschung und Erforschung von Infektionskrankheiten

Hier haben wir in der Erforschung von Infektionskrankheiten gebräuchliche Anwendungen adressiert, einschließlich Zelllinienentwicklung, Bindungsaffinität, Virusneutralisation, Virustiter und mehr. Der Fokus liegt auf der Bestrebung, das SARS-CoV-2-Virus zu verstehen, um potentielle Therapien für COVID-19 zu entwickeln, einschließlich Impfstoffe, Therapeutika und Diagnostika.

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Monoklonalität

Die Entwicklung von Zelllinien und die Sicherstellung der Monoklonalität sind entscheidende Schritte im Herstellungsprozess biopharmazeutischer Moleküle, wie z. B. monoklonaler Antikörper. Eine Zelllinie kann nach der Isolierung einer einzigen überlebensfähigen Zelle, die das Protein von Interesse robust exprimiert, etabliert werden. Ein entscheidender Meilenstein in diesem Prozess ist die Dokumentation des Nachweises der Klonalität. Die Dokumentation der Klonalität basiert üblicherweise auf Abbildungen, wobei eine Aufnahme einer einzelnen Zelle erstellt und in die Zulassungsunterlagen mit aufgenommen wird.

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Einzelzellsortierung

Die Entwicklung von Zelllinien erfordert das Auffinden einzelner aus Zellen hervorgegangener Klone, die hohe und gleichbleibende Mengen des therapeutischen Zielproteins herstellen. Der erste Schritt in diesem Prozess ist die Isolierung einzelner, überlebensfähiger Zellen. Die limitierende Verdünnungsreihe ist eine Technik, die sich auf statistische Wahrscheinlichkeit stützt, jedoch zeitraubend ist. Der CloneSelect Single-Cell Printer ermöglicht eine schonende Isolierung von Zellen auf eine Art und Weise, die die Überlebensfähigkeit von Zellen maximiert, und dabei auch einen direkten Nachweis der Klonalität durch eine Serie von fünf Bildern, die während des Absetzens der Zellen aufgenommen werden, bietet.

• Ein auf Mikrofluidik basierender Arbeitsablauf für das Aussäen von Einzelzellen und das Imaging von Mikroplatten, optimiert auf Effizienz, Überlebensfähigkeit und die Dokumentation der Monoklonalität
• Ein Arbeitsablauf, der die Isolation von Einzelzellen und das Mikroplatten-Imaging kombiniert, verbessert die Effizienz von Klonierungen bei verstärkter Sicherstellung der Klonalität
• Datenblatt: CloneSelect Single-Cell Printer