Nachweis, Quantifizierung und Analyse von Proteinen

E-Book: Nukleinsäure- und Proteinquantifizierung

Optimieren Sie Absorptions-Assays für die Quantifizierung von Nukleinsäuren und Proteinen

Absorptions-Mikroplatten-Reader finden in der Grundlagenforschung, Wirkstoffforschung, Bioassay-Validierung, Qualitätskontrolle und Fertigungsprozessen im akademischen Umfeld und der pharmazeutischen, biotechnologischen, Lebensmittel- und Getränke-Industrie eine verbreitete Anwendung. Diese Reader liefern schnelle und sensitive Messungen für eine Vielfalt von Analyten über große Konzentrationsbereiche hinweg und für ein großes Spektrum an Assays, einschließlich ELISAs, mikrobielles Wachstum, Nachweis von wichtigen Verbindungen und Kontaminanten sowie für die Proteinquantifizierung.

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ELISA

Enzyme-linked Immunosorbent Assays (ELISAs) werden dazu genutzt, die Menge eines bestimmten Proteins in einem Mikroplattenformat zu messen. Die Ergebnisse werden meistens über Absorption im sichtbaren Wellenlängenbereich ermittelt. Chemilumineszenz- und Fluoreszenz-ELISA-Formate bieten eine erhöhte Empfindlichkeit für die genaue Quantifizierung von weniger reichlich vorhandenen Analyten.

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Anwendungen für Fluoreszenzproteine

Proteine liegen innerhalb eukaryoter Zellen in einem dynamischen Zustand vor, in einem stark regulierten Gleichgewicht zwischen Synthese und Abbau. Während nach jahrzehntelanger Erforschung ein gutes Verständnis der Proteinsynthese besteht, hat unser Wissen über den Abbau von Proteinen erst in den letzten zwei Jahrzehnten größere Fortschritte gemacht. Fluoreszenzproteine können als Reporter eingesetzt werden, um die Proteindegradierung und zugehörige zelluläre Signalwege zu erforschen.

Erfahren Sie aus unseren Application Notes mehr darüber, wie fluoreszente Proteasom-Sensoren verwendet wurden.

• Multiplexing fluoreszenter und chemilumineszenter Lebendzell-Reporter zur Analyse der Voraussetzungen der NFκB-Signaltransduktion
• Messung der Proteasom-Inhibition in Lebendzellen mit den Analyst® GT, FLEXstation® und Gemini EM Mikroplatten-Readern unter Verwendung des BD Biosciences Proteasome Sensor

IgG-Quantifizierung

Die präzise und zuverlässige Vermessung der Titer monoklonaler Antikörper (z. B. IgG) ist in der Entwicklung und nachfolgenden Herstellung vieler biologischer Wirkstoffe unverzichtbar. Valita®TITER Assays vermessen IgG-Konzentrationen von 2,5 bis 100 mg/l oder 100 bis 2000 mg/l und nutzen dafür ein Hochdurchsatz-, Mix-and-Read-Format und die Fluoreszenzpolarisations(FP)-Messung. Die SpectraMax Multi-Mode Microplate Reader mit FP-Detektionsmodus wurden für die Durchführung von ValitaTITER Assays validiert. Sehen Sie in unseren Applikation Notes nach, um für jeden Reader Informationen zu den optimierten Konfigurationen zu erhalten:

• Hochdurchsatz-Plattform zur Quantifizierung von IgG für das Screening von Klonen während der Wirkstoffforschung und -entwicklung

Messen Sie Proteinkonzentrationen (Bradford, BCA usw.)

Die Proteinkonzentration kann durch die Messung der Absorption bei 280 nm in einem UV-Spektrophotometer direkt oder durch kolorimetrische Methoden wie BCA oder Bradford-Assays indirekt gemessen werden. Protein kann sogar mithilfe fluorometrischer Methoden quantifiziert werden.

Hier sind einige Application Notes zur Proteinquantifizierung, die Sie vielleicht interessant finden:

• Optimieren Sie die BCA-basierte Proteinquantifizierung auf dem SpectraMax iD5 Reader
• Messen Sie Gesamtprotein in Zelllysaten mit dem SpectraMax ABS Plus Microplate Reader
• Proteinquantifizierung mit dem EMax Plus Mikroplatten-Reader
• Unmittelbare Proteinquantifizierung mit der SpectraDrop Mikrovolumen-Mikroplatte
• Verwendung des NanoOrange Protein Kit mit den SpectraMax Mikroplatten-Readern

Tryptophannachweis

Die intrinsische Fluoreszenz von Proteinen entsteht durch die aromatischen Aminosäuren Tryptophan, Tyrosin und Phenylalanin. Tryptophan dominiert die Emission von Proteinen und zeigt die höchste Empfindlichkeit gegenüber der Lösungsmittelpolarität und der lokalen Umgebung. Die Analyse von Veränderungen der Tryptophan-Fluoreszenz kann Informationen über die Denaturierung und die Konformation eines Proteins liefern.

In diesen Application Notes demonstrieren wir die Leistungsfähigkeit der SpectraMax® Multi-Mode Microplate Reader in Assays zur Messung der intrinsischen Tryptophan-Fluoreszenz.

• Messen Sie die intrinsische Fluoreszenz von Tryptophan mit dem SpectraMax iD3 Mikroplatten-Reader
• Nachweis intrinsischen Tryptophans mit der SpectraMax i3 Multi-Mode Microplate Platform

Western Blot

Western Blotting ist eine beliebte Technik, die zum Proteinnachweis und zur Proteinquantifizierung angewendet wird. Erfahren Sie mehr über die vielen verschiedenen Techniken, die zum Nachweis von Proteinen auf Western Blot-Membranen angewendet werden, darunter kolorimetrische Methoden, Fluoreszenz und Chemilumineszenz. Zudem werden wir Ihnen ein neu- und einzigartiges System zur Western Blot-Detektion auf einem Multimodus-Mikroplatten-Reader vorstellen.

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