AAV-Plasmide
Was sind AAV-Plasmide?
Das AAV (Adeno-assoziiertes Virus), ein winziges Virus, das in der Bioproduktion weit verbreitet ist, wird aufgrund seiner begrenzten Replikation und seiner geringen Immunogenität beim Menschen bevorzugt. Die Herstellung hochqualitativer viraler Vektoren für den Gentransfer erfordert ein kompliziertes biologisches Herstellungsverfahren, das die Produktion von Plasmid-DNA und andere komplizierte Schritte umfasst.
AAV-Plasmidproduktions-Workflow
- Zellkulturen: Konstruktion von AAV-DNA-Vektoren und Plasmidexpansion. Vorbereitung und Amplifikation von Plasmiden, die für alle notwendigen Faktoren zur Erzeugung rekombinanter AAV-Partikel kodieren.
- Anpassung der Kulturbedingungen: Optimieren Sie Suspensions- oder adhärente Kultursysteme, einschließlich 3D- oder 2D-Formate, je nach Prozessanforderungen.
- Produktion von AAV-Vektoren: AAV-Vektor-DNA vorübergehend in Zellen einführen oder stabile Zelllinien 2–3 Tage lang für die Replikation und Expression etablieren.
- AAV-Rückgewinnung: Filtern und zentrifugieren Sie das Zellkulturmedium, um Rückstände zu entfernen und die AAV-Vektoren zu konzentrieren. Die Tangentialflussfiltration (TFF) kann zur weiteren Reinigung verwendet werden. Das Einfangen und die Rückgewinnung von AAV-Partikeln aus Zellkulturmedien oder -lysaten erfolgt nach den für rekombinante Proteine verwendeten Standardtechniken wie Präzipitierung, Zentrifugation, Chromatographie und Tangentialflussfiltration.
- AAV-Aufreinigung: Verwenden Sie Ultrazentrifugation und Chromatographie, wie Affinitäts- oder Ionenaustauschverfahren, um hochreine AAV-Vektorpräparate zu erhalten. Die Qualitätskontrolle sollte während des gesamten Prozesses beibehalten werden.
- AAV-Titration: Die quantitative und qualitative Analyse von AAV-Vektoren zur Ermittlung des höchsten Titers kann mit Standardtechniken einschließlich Echtzeit-PCR durchgeführt werden.
- Transduktion von Säugetierzellen: Die gereinigten AAV-Partikel können für die Transduktion von Säugetierzelllinien von Interesse, einschließlich IPSCs, 3D-Organoiden und CAR-T-Zelltherapie, verwendet werden.
- Klon-Screening und -Auswahl: Um erfolgreich transduzierte Klone zu identifizieren, ist ein klonales Screening erforderlich. Die Selektion hochwertiger Klone und die Anreicherung von Pools können mit automatisierten Hochdurchsatzverfahren durchgeführt werden.
- Auflösung der Heterogenität und Isolierung von Einzelzellen: Die Heterogenität des Klonpools wird durch Isolierung von Einzelzellen in Verbindung mit einer auf Imaging basierten Analyse aufgelöst, wodurch der Nachweis der Monoklonalität der etablierten AAV-transduzierten Zelllinie gewährleistet wird.
- Expansion und Charakterisierung: Die nachgeschaltete Charakterisierung der Zielzelllinie kann mit automatisierten High-Content-Imaging-Lösungen und ELISA-Tests durchgeführt werden.
Innovative Lösungen zur Optimierung Ihres AAV-Plasmidproduktions-Workflows
Bei Molecular Devices verstehen wir die Feinheiten der AAV-Plasmidproduktion. Unser Angebot an fortschrittlichen technologischen Lösungen ist sorgfältig darauf ausgerichtet, jede Phase Ihres Workflows zu unterstützen und zu optimieren. Wir konzentrieren uns auf Präzision, Effizienz und Skalierbarkeit und sind bestrebt, in jedem Schritt Ihres Produktionsprozesses für AAV-Plasmide Spitzenleistungen zu erbringen, damit Ihr Unternehmen branchenführende Ergebnisse erzielt.
QPix™ Picker für mikrobielle Kolonien
Anwendung im AAV-Arbeitsablauf:
- Wird in der Phase der Konstruktion von AAV-DNA-Vektoren und der Plasmidexpansion verwendet.
- Pickt effizient Kolonien mit den gewünschten Plasmidkonstrukten.
- Kann für das Screening von Kolonien mit spezifischen Phänotypen verwendet werden, um sicherzustellen, dass das richtige Plasmidkonstrukt ausgewählt wird.
Merkmale:
- Aufnahme von bis zu 3.000 Kolonien pro Stunde.
- Unterstützt eine Vielzahl von Mikroorganismen und Selektionsmodalitäten.
- Gewährleistet Sterilität durch UV-Licht-Desinfektion und Waschen der Nadeln.
- Bietet mehrere Imaging-Modi für eine präzise Auswahl der Kolonien.
- Bietet automatisierte Plattierungs- und Ausstrich-Fähigkeiten.
- Skalierbare Automatisierungsoptionen für variierende Durchsatzanforderungen.
ClonePix™ Säugerzelllinie-Kolonie Picker
Anwendung im AAV-Arbeitsablauf:
- Wird in der Klon-Screening- und -Selektionsphase verwendet.
- Screent und selektiert hochwertige Klone auf der Grundlage der Proteinproduktivität und anderer Eigenschaften.
Merkmale:
- Automatisiertes System zur Selektion hochwertiger Klone.
- Erhöht die Wahrscheinlichkeit, optimale Zelllinien zu finden.
- Bietet mehrere Nachweismethoden, einschließlich Fluoreszenz.
- Aufrechterhaltung der Sterilität durch UV-Licht und Waschen der Nadeln.
- Verwendet halbfeste Medien für die Bildung getrennter Kolonien.
CloneSelect™ Imager FL
Anwendung im AAV-Arbeitsablauf:
- Wird in der Expansions- und Charakterisierungsphase verwendet.
- Ermöglicht Imaging und Analyse von Säugetierzellen und gewährleistet so die Monoklonalität.
- Kann verwendet werden, um Gen-Editierung zu überprüfen.
Merkmale:
- Bietet sowohl Weißlicht- als auch Fluoreszenz-Imaging.
- Erzeugt eine automatische Konfluenzanalyse und Monoklonalitätssicherung.
- Schnelle Erfassungszeiten mit der Möglichkeit für das Imaging einer 96-Well-Platte in weniger als zwei Minuten.
- Kompatibel mit verschiedenen Zelltypen, einschließlich CHO, HEK und iPSCs.
- Bietet hochauflösende Bilder und intelligente Analysen.
DispenCell™ Single-Cell Dispenser
Anwendung im AAV-Arbeitsablauf:
- Wird in der Auflösungsphase der Heterogenität und der Isolierung von Einzelzellen verwendet.
- Dispensiert einzelne Zellen, um die Monoklonalität der etablierten AAV-transduzierten Zelllinie zu gewährleisten.
Merkmale:
- Sofortiger und zurückverfolgbarer Nachweis der Klonalität.
- Schonende Behandlung bewahrt die Überlebensfähigkeit von Zellen.
- Das kompakte Design passt in verschiedene Laborumgebungen.
- Verwendet eine Einwegspitze, um Kreuzkontaminationen zu vermeiden.
- Intuitive Schnittstelle ohne notwendige Kalibrierung.