CloneSelect Imager

Zelllinienentwicklung

Die Entwicklung von Zelllinien ist ein wesentlicher Schritt im Prozess der Erzeugung biopharmazeutischer Moleküle wie z. B. monoklonaler Antikörper. Der Prozess beginnt meistens mit der Transfektion des Wirtszelltyps mit DNA, die das therapeutische Protein von Interesse kodiert. Eine zufällige oder gezielte Integration der Ziel-DNA in das Genom der Wirtszelle wird so ermöglicht. Tausende von Klonen werden überprüft, um dann die wenigen zu isolieren, die große Mengen produzieren – ein manueller und zeitaufwendiger Prozess.

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Zellüberlebensfähigkeit

Die Entwicklung von Zelllinien erfordert das Auffinden einzelner aus Zellen hervorgegangener Klone, die hohe und gleichbleibende Mengen des therapeutischen Zielproteins herstellen. Ein wesentlicher erster Schritt in diesem Prozess ist die Isolierung einzelner, überlebensfähiger Zellen. Einzelzellen proliferieren, um Kolonien zu bilden, die dann danach bewertet werden können, wie produktiv sie das therapeutische Zielprotein herstellen. Die Überlebensfähigkeit und die Wachstumsraten von Klonen, die aus einzelnen Zellen hervorgegangen sind, können mit dem CloneSelect Imager und dem SpectraMax i3x Mikroplatten-Reader und Imaging Cytometer bestimmt werden.

• Erstellen von Konfluenz- und Wachstumskurven mit dem CloneSelect Imager
• Messung der Überlebensfähigkeit von Zellen und von Zytotoxizität mit dem EarlyTox Zellintegritätskit
• Lumineszente Assays für Zellviabilität und Zytotoxizität
• Broschüre: SpectraMax i3x

Koloniebildungs-Assay

Der Koloniebildungs-Assay in Soft Agar ist eine klassische und renommierte Technik zur Beschreibung der Fähigkeit von Zellen, verankerungsunabhängiges Wachstum, ein Kennzeichen der Krebsentstehung, zu zeigen. Nach dem Aussähen der Zellen in einer Matrix, die die Koloniebildung verstärkt, wie z. B. halbfeste Medien, werden die Zellen üblicherweise mit Verbindungen inkubiert, die das Wachstum der Kolonie eventuell beeinträchtigen können. Der CloneSelect Imager kann jede Vertiefung abbilden und die Konfluenz automatisch berechnen, Anzahl und Fläche der Kolonien einschätzen und das Wachstum der Kolonien nachverfolgen.

Labelfreie Zellmigration

Wundheilungs-Assays werden in vielen Disziplinen zur Untersuchung der Zellmigration, der koordinierten Bewegung von Zellpopulationen, angewendet. Dabei wird in einem in einer Mikroplatte gewachsenen Monolayer von Zellen per Hand oder standardisiert eine Wunde erzeugt. Die Mikroplatte kann dann zum Screening einer Bibliothek genutzt werden, um die Auswirkungen auf die Zellmigration zu beobachten. Mit diesem Ansatz können die Auswirkungen einer Bibliothek von Verbindungen oder Genen untersucht werden. Der CloneSelect Imager ermöglicht das schnelle Imaging (< 90 Sek. pro Platte) und eine objektive automatisierte Analyse der Zellmigration. 

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Sicherstellung der Monoklonalität

Die Entwicklung von Zelllinien und die Sicherstellung der Monoklonalität sind entscheidende Schritte im Herstellungsprozess biopharmazeutischer Moleküle, wie z. B. monoklonaler Antikörpern. Eine Zelllinie kann nach der Isolierung einer einzigen überlebensfähigen Zelle, die das Protein von Interesse robust exprimiert, etabliert werden. Ein entscheidender Meilenstein in diesem Prozess ist die Dokumentation des Nachweises der Klonalität. Die Dokumentation der Klonalität basiert üblicherweise auf Abbildungen, wobei eine Aufnahme einer einzelnen Zelle erstellt und in die Zulassungsunterlagen mit aufgenommen wird.

• Sichere Identifizierung monoklonaler, in halbfesten Medien gewachsener CHO-S-Zellen
• Schnelle Methoden zur Verifizierung der Monoklonalität für eine beschleunigte Zelllinienentwicklung
• Zuverlässige Sicherstellung der Klonalität durch Verwendung von Calcein-AM mit minimalen Auswirkungen auf die Überlebensfähigkeit
• Broschüre: CloneSelect Imager