Messung des intrazellulären Calcium-Flusses
G-Protein-gekoppelte Rezeptoren (GPCRs) spielen in der Signaltransduktion von Zellen eine wichtige Rolle. Wenn der Rezeptor von einem Liganden aktiviert wird, verändert sich die Konformation des Rezeptors und triggert die Aktivierung von G-Proteinen im Inneren der Zelle. Ein aktives G-Protein verfügt über das Potential, viele verschiedene Kaskaden intrazellulärer Botenstoffe zu induzieren, darunter Calcium. Mit dem FLIPR System lassen sich funktionelle zellbasierte Hochdurchsatz-Assays durchführen und es ist in der Wirkstoffforschung das System der Wahl zur Beurteilung von Veränderungen der intrazellulären Calciumkonzentration, die durch die Verwendung fluoreszenter calciumsensitiver Reporterfarbstoffe nachgewiesen wird. Hier stellen wir ein grundlegendes Protokoll zur Durchführung eines Calciummobilisierungs-Assays auf dem FLIPR System zur Verfügung, für das der FLIPR® Calcium Assay Kit, ein homogener, schneller und zuverlässiger Fluoreszenz-Assay, verwendet wurde.
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