Arbeitsablauf für Antikörper-Discovery mit Hybridomen

Arbeitsablauf für die Hybridomerzeugung und das Screening großer Antikörperbibliotheken

Die Hybridom-Technologie ist eine Methode zur Massenproduktion von Antikörpern in einer Hybridzelllinie, die durch die Fusion einer Antikörper-produzierenden B-Zelle mit einer immortalisierten Myelomzelllinie erzeugt wurde, und nun als Hybridomzelle bezeichnet wird. Weil jede B-Zelle einen einzigartigen Antikörper produziert, kann die Klonierung einzelner Hybridome genutzt werden, um im großen Maßstab eine vielfältige Bibliothek mit einzigartigen monoklonalen Antikörpern zu erzeugen, die sehr häufig für die Prävention, Diagnose und Behandlung von Erkrankungen eingesetzt werden.

Schritt 1: Fusion 

Der Prozess, eine B-Zelle, die einen einzigartigen Antikörper produziert, mit einer Myelomzelle zu fusionieren und dadurch eine Hybridzelllinie zu erzeugen, wird Fusion genannt.
 

Schritt 2: Klon-Screening 

Die Identifizierung von Zelllinien, die von Klonen abstammen und die große Mengen monoklonaler Antikörper produzieren.
 

Schritt 3: Zellwachstum 

Das Zellwachstum wird bestimmt, indem die Zellteilungen über einen vorgegebenen Zeitraum hinweg mittels labelfreiem Imaging beobachtet werden.
 

Schritt 4: Spezifität und Kreuzreaktivität  

Der Prozess, die Fähigkeit von Antikörpern zu analysieren, ausschließlich an ein Zielantigen zu binden.
 

Schritt 5: Bindungsaffinität und Internalisierung 

Die Bindungsaffinität bezeichnet die Stärke der Bindungs-Wechselwirkung zwischen einem einzelnen Biomolekül (z. B. Protein oder DNA) und seinem Liganden / Bindungspartner (z. B. Wirkstoff oder Inhibitor). Die Internalisierung ist der Prozess, die Fähigkeit eines vorgegebenen Partikels, in die Zelle einzudringen, zu überprüfen.