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Assays zur Erkennung von Kontaminierungen

Assays zur Erkennung von Kontaminierungen sind bei einem großen Spektrum von Anwendungen zur Messung der Kontamination in verschiedenen Inhaltsproben von Fermentationsüberständen und Reinigungsprozessen bis hin zu biochemischen Präparationen wie etwa Serum und andere Körperflüssigkeiten einsetzbar. Sie ermöglichen auch die Messung des Vorhandenseins von Wirtszellen-DNA sowie anderer DNA, die während des biopharmazeutischen Herstellungsprozesses eingeführt worden sein kann.

Molecular Devices bietet zwei Assay-Kits zur Erkennung von Kontaminierungen unter der Marke Threshold an: Den Threshold® Immunoligand-Assay (ILA) und den Threshold® Total DNA-Assay

Der Threshold Immunoligand-Assay misst ein breites Spektrum von Analyten, z. B. Proteine, Peptide, sequenzspezifische DNA und Mikroorganismen für die Entwicklung und Herstellung von Biopharmazeutika. Das Probenspektrum reicht von Fermentationsüberständen, Proben aus einem Reinigungsprozess und anderen biochemischen Präparationen bis hin zu Serum bzw. anderen Körperflüssigkeiten. Die Assays können je nach Größe und Eigenschaften des zu messenden Analyten im Sandwich-Format oder in Form kompetitiver Assays entwickelt werden.

Der Threshold Total DNA-Assay ermöglicht die quantitative Messung von einzelsträngiger DNA im Picogrammbereich. Anders als Hybridisierungstechniken, für die DNA-Proben oder -Primer mit einer spezifischen Nukleinsäuresequenz benötigt werden, misst der Threshold Gesamt-DNA-Assay DNA mit breiter Sequenzspezifität. Dadurch ist das Threshold System in der Lage, Wirtszellen-DNA sowie andere DNA zu messen, die während des biopharmazeutischen Herstellungsprozesses eingeführt worden sein kann. Da der Assay keine sequenzspezifischen Proben oder Primer erfordert, lässt er sich darüber hinaus leicht bei Proben unterschiedlicher Art anwenden, die aus verschiedenen Wirtsorganismen extrahiert worden sind.

Threshold
® Immunoligand-Assay (ILA)
Threshold
® Total DNA-Assay
Markierter Antikörper
Threshold ILA-Assay, markierter Antikörper
Markierter Antikörper
Threshold DNA-Assay, markierter Antikörper
Reaktionsstufe
Threshold ILA-Assay, Reaktionsstufe
Reaktionsstufe
Threshold DNA-Assay, Reaktionsstufe
Separationsstufe
Threshold ILA-Assay, Trennungsstufe
 Separationsstufe
Threshold DNA-Assay, Trennungsstufe
Detektionsstufe
Threshold ILA-Assay, Detektionsstufe
Detektionsstufe
Threshold DNA-Assay, Detektionsstufe
In the Reaktionsstufe werden die markierten Antikörper, die Probe mit den Analyten, Streptavidin und Anti-Fluoreszein/Urease-Konjugat aus dem ILA-Detektionskit miteinander inkubiert, um einen Reaktionskomplex zu bilden. Da diese Bindung in Lösung stattfindet, bleiben alle Moleküle in ihrer nativen Konformation, sodass eine genaue Messung des Analyten und der 100 % Aktivität der Antikörper gewährleistet ist. Die Bildung des Reaktionskomplexes im Gesamt-DNA-Assay läuft auf ähnliche Weise ab, indem biotinyliertes einzelsträngiges Bindungsprotein und ein an Urease konjugierter Anti-ssDNA-Antikörper ohne Sequenzspezifität an einzelsträngige DNA binden. Alle Assaybestandteile sind im Total DNA Assay-Kit enthalten.

In der Trennungsstufe werden die Reaktionskomplexe aufgrund der starken Affinität von Streptavidin für Biotin auf einer biotinylierten Membran durch einen Filtrationsschritt gebunden und konzentriert. Die Threshold Workstation weist vier 8-Kanal-Filtrationseinheiten auf und bietet die Möglichkeit, zwei weitere Hilfsanschlüsse hinzuzufügen, sodass insgesamt 96 Proben gleichzeitig filtriert werden können.

In der Detektionsstufe wird der auf der Membran gebundene Reaktionskomplex in den Threshold Reader gegeben, der als Substrat Urea und den lichtsteuerbaren potentiometrischen Sensor (LAPS, Light-Addressable Potentiometric Sensor) enthält. In dem Reader wird Urea durch Urease hydrolysiert, wodurch in einem Mikrovolumen von weniger als 1 µl eine Veränderung des pH-Werts herbeigeführt wird. In einer 90-sekündigen kinetischen Messung detektiert der Sensor die Urease-Aktivität von acht verschiedenen Proben gleichzeitig. Die sehr hohe Empfindlichkeit, Präzision und Reproduzierbarkeit des Threshold® Systems sind auf die Kombination des geringen Probenvolumens mit dem rauscharmen Sensor zurückzuführen.

Der Threshold® Immunoligand-Assay (ILA) und der Threshold® Total DNA-Assay sind mit dem folgenden System kompatibel:


Weitere Informationen finden Sie in der Kompatibilitätstabelle für Assay-Kits und Instrumente.

Threshold® Immunoligand-Assay (ILA)

Produktbezeichnung Beschreibung Artikelnummer
Immunligand-Assay
Nachweis-Kit
[192 Bestimmungen]
1 universelles Standardreagenz
6 Enzymreagenzien
1 Bindungsreagenz
6 Threshold Leerwertstäbchen
24 Threshold Stäbchen
1 Substrat
1 Assaypufferkonzentrat
1 Waschpufferkonzentrat
R9003
Immunligand-Assay
Markierungskit
2 Fläschchen mit Biotin-Marker (5 mg/Fläschchen)
2 Fläschchen mit Fluoreszein-Marker (5 mg/Fläschchen)
R9002


Threshold® Total DNA-Assay

Produktbezeichnung Beschreibung Artikelnummer
Total DNA Assay-Kit
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Bulk-Kit
[64 Messungen]
10 Threshold Sticks
6 Nullkalibratoren
2 Positivkontrollen
2 Kalibrator für hohe Werte
8 DNA Markierungsreagenzien
1 Rekonstitutionspuffer
1 Substratkonzentrat
2 Waschlösungen
1 Filtereinheitenset (8 Einheiten)
 
[800 Messungen]
104 Schwellen-Sticks
20 Schwellen-Leerwertstäbchen
66 Nullkalibratoren
20 Positivkontrollen
20 Kalibrator für hohe Werte
100 DNA-Markierungsreagenzien
13 Rekonstitutionspuffer
10 Substratkonzentrat
19 Waschlösungen
13 Filtereinheitenset (104 Einheiten)
R9009
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
R9004