Neurotransmitter-Transporter-Aufnahme-Assay-Kit

Bis vor Kurzem wurden für die Messung der Aufnahme von Serotonin-, Norepinephrin- und Dopamin-Transportern radioaktiv markierte Verbindungen eingesetzt. Mit der Einführung des Neurotransmitter-Transporter-Aufnahme-Assay-Kits steht nun ein Werkzeug zum Screening der Kinetik der Aufnahme dieser drei wichtigen Neurotransmitter in Lebendzellen zur Verfügung.

  • Der homogene Lebendzell-Fluoreszenz-Assay ersetzt radioaktive Assays, reduziert somit Entsorgungskosten und eliminiert die mit radioaktiven Markern arbeitenden Assays verbundenen Sicherheitsrisiken
  • Das homogene Ein-Schritt-Assayformat ermöglicht eine Automatisierung und High-Throughput-Screening
  • Zwei Assaykonfigurationen bieten mehr Flexibilität: Endpunkt-Modus für High-Throughput-Anwendungen oder Echtzeit-Kinetik-Modus für mechanistische Studien

Daten des Neurotransmitter Transporter Uptake Assay Kit

  • Nisoxetin-Inhibition in HEK-hSERT-Zellen

    Nisoxetin-Inhibition in HEK-hSERT-Zellen

    HEK-Zellen mit stabiler Expression von humanem SERT wurden mit 10.000 Zellen pro Well in Poly-D-Lysin-beschichteten 384-Well-Platten ausplattiert und über Nacht inkubiert. Das Medium wurde entfernt, und die Zellen wurden mit Nisoxetin (veröffentlichte Ki = 383 nM) in HBSS/0,1 % BSA 10 Minuten bei 37 °C inkubiert, bevor Farbstoff zugegeben wurde. Der Assay wurde entsprechend dem Versuchsprotokoll durchgeführt und auf dem FlexStation® 3 Reader von Molecular Devices für 30 Minuten im Kinetik-Modus gemessen.

  • Flexibilität beim Plattieren

    HEK-Zellen mit stabiler Expression von humanem NET wurden über Nacht (leere blaue Kreise) oder am Tag des Assays (gefüllte schwarze Kästchen) mit 20.000 Zellen pro Well in Poly-D-Lysin-beschichteten 384-Well-Platten ausplattiert, und den Zellen wurde 3 Stunden Zeit gegeben, um sich an die Wells anzulagern. Das Medium wurde entfernt, und die Zellen wurden mit Nomifensin in HBSS/0,1 % BSA 10 Minuten bei 37 °C inkubiert, bevor Farbstoff zugegeben wurde. Der Assay wurde auf dem FlexStation® 3 Reader für 30 Minuten im Kinetik-Modus gemessen. Die Inhibitionskurve ist als Integral (Fläche unter der Kurve) ausgedrückt.

    Flexibilität beim Plattieren

  • IC50-Korrelation für DAT, NET und SERT (Kundenergebnisse)

    IC50-Korrelation für DAT, NET und SERT (Kundenergebnisse)

    Zellen mit stabiler Expression von humanem DAT, NET und SERT wurden über Nacht mit 60,000 Zellen/Well (96-Well-Platte) ausplattiert und mit 8 verschiedenen bekannten Inhibitoren behandelt. Nach 10 Minuten wurde die Farbstofflösung zugegeben und der Assay wurde dem vorstehend beschriebenen Protokoll entsprechend durchgeführt. Aus den resultierenden Daten wurde anhand der Cheng-Prusoff-Gleichung der logarithmische Ki-Wert bestimmt und dessen Korrelation mit bekannten Ki-Werten aller drei Transporter ermittelt. Im Schaubild sind die Korrelationskoeffizienten R2 für jeden Transporter dargestellt, der Korrelationskoeffizient (R2-Wert) aller 24 Werte betrug 0,91.

Technologie des Neurotransmitter Transporter Uptake Assay Kit

  • Prinzip des Neurotransmitter Assay

    Prinzip des Neurotransmitter Assay

    Das Neurotransmitter-Transporter-Aufnahme-Assay-Kit verwendet ein fluoreszentes Substrat, das biogene Amin-Neurotransmitter imitiert und von deren spezifischen Transportern in die Zelle geschleust wird. Dies führt zu einer erhöhten intrazellulären Fluoreszenzintensität, die mit einem durch den Plattenboden messenden Mikroplatten-Reader in Echtzeit überwacht wird. Bei diesem praktischen Verfahren ohne Wäsche werden Zellen mit dem Kit-Reagenz inkubiert und zur Auswertung in den Platten-Reader gestellt. Der Assay ist ideal für die Verwendung im akademischen, biotechnologischen und pharmazeutischen Bereich für Forschung, Assayentwicklung und Screening geeignet.

  • Arbeitsablauf Neurotransmitter-Transporter

    Arbeitsablauf Neurotransmitter

    Weitere Details finden Sie in der Packungsbeilage des Neurotransmitter Transporter Uptake Assay Kit. Diese ist über die Wissensbasis von Molecular Devices abrufbar.

Bestelloptionen für den Neurotransmitter Transporter Uptake Assay Kit

Neurotransmitter-Transporter-Aufnahme-Assay-Kit

Evaluations-Kit

  • 1 Fläschchen = 1 Platte x je 2 Fläschchen

#R6138

$164.00 USD

1

Explorer-Kit

  • 1 Fläschchen = 1 Platte x 5 Fläschchen

#R8173

$629.00 USD

1

Bulk-Kit

  • 1 Fläschchen = 10 Platten x 5 Fläschchen

#R8174

$4,500.00 USD

1

Ressourcen für den Neurotransmitter Transporter Uptake Assay Kit

Kompatible Produkte und Service des Neurotransmitter Transporter Uptake Assay Kit

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