Überblick über den FLIPR Kalium-Assay-Kit
Der FLIPR Kalium-Assay-Kit nutzt die Durchlässigkeit von spannungsabhängigen wie auch Liganden-gesteuerte Kalium-(K+)-Kanälen für Thalliumionen (Tl+). In diesem Assay wird ein neuartiger hochempfindlicher Tl+-Indikatorfarbstoff verwendet, der bei Bindung an durch Kaliumkanäle geleitetes Tl+ ein leuchtendes Fluoreszenzsignal hervorbringt. Die Intensität des Tl+-Signals ist proportional zur Anzahl offener Kaliumkanäle und liefert daher Aufschluss über die funktionelle Aktivität der Kaliumkanäle. Darüber hinaus wird einer unserer firmeneigenen Maskierungsfarbstoffe verwendet, um die Hintergrundfluoreszenz weiter zu reduzieren und das Signal-Rausch-Verhältnis zu verbessern.
- Funktionelle Messung der Kaliumkanalaktivität in einem zellbasierten Assay
- Das homogene Protokoll ohne Waschen reduziert die Well-abhängige Variation und vereinfacht den Arbeitsablauf
- Größeres Signalfenster im Vergleich zu einem nicht-homogenen Assay
- Rasches Verfahren mit weniger Arbeitsschritten
Daten des FLIPR Kalium-Assay-Kits
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Vergleich von Kalium Kits
Ergebnisvergleich zwischen dem FLIPR Kalium-Assay-Kit und dem Kit eines anderen Anbieters.
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Vergleich von Signalfenstern
Vergleich der dynamischen Signalbereiche zwischen dem FLIPR Kalium-Assay-Kit und einem Mitbewerber-Kit. Die Negativkontrolle ist 4 μM Terfenadin; die Positivkontrolle ist Puffer. Der Z’-Faktor für das FLIPR Kalium-Assay-Kit = 0,85 und n = 32 im Vergleich zum Kit des anderen Anbieters: Z’-Faktor = 0,64 und n = 30.
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Inhibition des hERG-Kanals
Konzentrationsabhängige Inhibition des hERG-Kanals durch Referenzverbindungen.
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Optimierung des hERG-Kanal-Stimulans
Die Zellen wurden mit Farbstoff inkubiert, und während des Nachweises auf dem FLIPR Tetra System wurden die Stimulanspuffer zugegeben. Die konzentrationsabhängige Reaktion des Signals wurde unter verschiedenen Bedingungen beschrieben. Die Kombination aus 1 mM Tl+ und 10 mM K+ (Endkonzentration) Stimulanspuffer, verdünnt in chloridfreiem Puffer, lieferte ein optimales Signal.
Technologie des FLIPR Potassium Assay Kits
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Funktionsweise des Assay-Kits
Der Assay nutzt die Durchlässigkeit von Thallium (Tl+) für Kalium-(K+)-Kanäle. Die Zellen werden mit einer AM-Esterform eines fluoreszenten Thallium-empfindlichen Farbstoffs inkubiert. Intrazelluläre Esterasen spalten die AM-Gruppe ab, sodass der Farbstoff in den Zellen eingeschlossen wird. Anschließend werden die Zellen entweder mit einem Gemisch aus K+ und Tl+ oder mit einem Liganden im Beisein von Tl+ stimuliert. Die Verstärkung des Fluoreszenzsignals repräsentiert den spezifischen Einstrom von Tl+ in die Zelle durch den Kaliumkanal und wird so zu einem Maß für dessen funktionelle Aktivität. Das Hintergrundsignal wird mit der Maskierungslösung reduziert.
Funktionsweise des Assay-Kits
Der Assay nutzt die Durchlässigkeit von Thallium (Tl+) für Kalium-(K+)-Kanäle. Die Zellen werden mit einer AM-Esterform eines fluoreszenten Thallium-empfindlichen Farbstoffs inkubiert. Intrazelluläre Esterasen spalten die AM-Gruppe ab, sodass der Farbstoff in den Zellen eingeschlossen wird. Anschließend werden die Zellen entweder mit einem Gemisch aus K+ und Tl+ oder mit einem Liganden im Beisein von Tl+ stimuliert. Die Verstärkung des Fluoreszenzsignals repräsentiert den spezifischen Einstrom von Tl+ in die Zelle durch den Kaliumkanal und wird so zu einem Maß für dessen funktionelle Aktivität. Das Hintergrundsignal wird mit der Maskierungslösung reduziert.
Ressourcen für den FLIPR Kalium-Assay-Kit
Application Note
Beschreibung von hERG-Kanalblockern mit dem FLIPR-Kalium-Assay-Kit auf dem FlexStation 3 Multi-Mode-Mikroplatten-Reader
Characterization of hERG channel blockers using the FLIPR Potassium Assay Kit on the FlexStation 3 Multi-Mode Microplate Reader
Wir stellen die Anwendbarkeit eines neuen Kalium-Assay-Kits zur Untersuchung der Aktivität der hERG-Verbindung auf dem FLIPR® Tetra System vor. Der Assay nutzt die Durchlässigkeit von Thallium (Tl+) für …
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Application Note
Beschreibung von hERG-Kanalblockern mit dem FLIPR Potassium Assay Kit auf dem FLIPR Tetra System
Characterization of hERG channel blockers using the FLIPR Potassium Assay Kit on the FLIPR Tetra System
Die durch Wirkstoffe verursachte Inhibition des humanen Ether-à-go-go-Related Gen (hERG)-Ionenkanals wurde mit der Anfälligkeit von Patienten für potentiell tödliche ventrikuläre Tachyarrhythmien, …
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Application Note
Entwicklung eines zellbasierten Kaliumchlorid-Transporter-Assays mit dem FLIPR Kalium-Assay-Kit
Development of a cell-based potassium-chloride transporter assay using the FLIPR Potassium Assay Kit
Das FLIPR Potassium Assay Kit kann zur Messung der funktionellen Aktivität des hKCC2-Kationchlorid-Kotransporters mit einem homogenen Protokoll ohne Waschen verwendet werden. Das Assay-Kit zeigt ein …
E-Book
Optimierte Assays für die Spitzenforschung
Optimized Assays for Breakthrough Research
Die biologische Forschung wurde durch die Verfügbarkeit von standardisierten Assay-Kits, Instrumenten und Assay-Protokollen von gewerblichen Herstellern erheblich vereinfacht.
Wissenschaftliche Poster
In-Vitro-Untersuchung der Wirksamkeit von hERG-Inhibitoren: Zellbasierter Thallium-empfindlicher Fluoreszenz-Assay vs. Automatisierte Elektrophysiologie
In Vitro Potency Assessment of hERG Inhibitors: Cell-Based Thallium-Sensitive Fluorescence Assay vs. Automated Electrophysiology
Erkunden Sie dieses Poster, um die Leistungsfähigkeit kennenzulernen, die der Thallium-sensitive, auf Fluoreszenzfarbstoff basierende Assay auf dem FLIPR Tetra im Vergleich zu den Techniken elektrophysiologischer Aufzeichnungen erbringt.
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Wissenschaftliche Poster
Ein neuartiger homogener Kaliumionenkanal-Assay für das High-Throughput-Screening
A Novel Homogenous Potassium Ion Channel Assay for High-Throughput Screening
Ionenkanäle stellen eine Klasse von Membranproteinen dar, die den Durchtritt geladener Ionen durch die Zellmembran vermitteln. Kaliumkanäle bilden die größte und vielfältigste Gruppe von Ionenkanälen …
Videos und Demonstrationen
Entwicklung eines In-vitro-Tl+-Flux-Assays zur Identifizierung von Kaliumkanal-Agonisten