Überblick über die Enzym – IMAP Assays

Basierend auf der spezifischen, hochaffinen Wechselwirkung mit dreiwertigen metallhaltigen Nanopartikeln (Perlen) ist IMAP eine generische, nicht-Antikörper-basierte Plattform zur Beurteilung der Kinase-, Phosphatase- und Phosphodiesterase-Aktivität Eine Enzymreaktion wird mit einem fluoreszent-markierten Substrat ausgelöst. Die Zugabe des IMAP-Bindungssystems stoppt die Enzymreaktion und initiiert die Bindung der Kügelchen an phosphorylierte Substrate. Die Bindung des Substrats an die Kügelchen, die mit der Enzymaktivität korreliert, kann entweder mit einer FP- oder mit einer TR-FRET-Auslesung erkannt werden.

Progressives IMAP-Bindungssystem

IMAP-Substrate

Daten aus IMAP-Assays

  • Probedaten aus IMAP: ROCKII Verdünnungskurve

    Probedaten aus IMAP FP: ROCKII Verdünnungskurve

    Enzymverdünnungskurven für ROCKII in BSA und im Tween IMAP Reaktionspuffer bei Verwendung des progressiven Bindungssystems. Reaktionsbedingungen: ROCKII Kinase (Upstate: 14–451) wie angezeigt, 100 nm aus FAM-S6 gewonnenes Substrat (5FAM-AKRRRLSSLRA-COOH, R7184), 100 µm ATP. IMAP-Bindungslösungsbedingungen: 100 % Bindungspuffer A, progressives Bindungsreagenz 1:400.

  • FP-Detektion im Vergleich mit TR-FRET-Detektion

    Akt-Inhibition mit Staurosporin: Vergleich zwischen IMAP TR-FRET- (oben) und IMAP FP-Detektion (unten). Reaktionsbedingungen: Akt-Kinase (0,1 U/ml, Upstate: 14–276), 300 nm, 1 µm, 3 µm FAM-Crosstide (5FAM-GRPRTSSFAEG-COOH, R7110), 10 µm ATP, Staurosporin wie angezeigt. IMAP-Bindungslösung: 40 % Bindungspuffer A, 60 % Bindungspuffer B, progressives Bindungsreagenz 1:400.

    FP- vs. TR-FRET-Detektion

Technologie der Enzym – IMAP Assays

  • IMAP FP generische Kinase- und Phosphatase-Assays

    Generische IMAP FP-Kinase- und -Phosphatase-Assays

    IMAP-Prinzip mit FP-Auslesung: Die Bindungslösung wird nach der Kinasereaktion mit einem fluoreszent markierten Peptid hinzugefügt. Das kleine, phosphorylierte, fluoreszente Substrat bindet sich an die großen, M(III)-basierten Nanopartikel, was die Rotationsgeschwindigkeit des Substrats reduziert und so dessen Polarisation steigert.

  • IMAP TR-FRET generische Kinase- und Phosphatase-Assays

    Generische IMAP TR-FRET-Kinase- und -Phosphatase-Assays

    IMAP-Prinzip mit TR-FRET-Auslesung: Die Bindungslösung wird nach der Kinasereaktion mit einem fluoreszent markierten Peptid oder Protein hinzugefügt. In diesem System ist der Nanopartikel mit einem Terbium-(Tb)-Donator-Molekül gespickt. Durch Bindung an die gespickten M(III)-basierten Nanopartikel gerät das phosphorylierte fluoreszente Substrat in nächste Nähe des Tb-Donators, was die Messung des TR-FRET zwischen dem Tb-Donator und dem phosphorylierten fluoreszenten Substrat ermöglicht.

  • IMAP FP generische Phosphodiesterase-Assays

    Generische IMAP FP-Phosphodiesterase-Assays

    IMAP-Prinzip mit FP-Auslesung: Die Bindungslösung wird nach der Phosphodiesterasereaktion mit einem fluoreszent markierten Substrat hinzugefügt. Das kleine, phosphorylierte, fluoreszente Substrat bindet sich an die großen, M(III)-basierten Nanopartikel, was die Rotationsgeschwindigkeit des Substrats reduziert und so dessen Polarisation steigert.

  • IMAP TR-FRET generische Phosphodiesterase-Assays

    Generische IMAP TR-FRET-Phosphodiesterase-Assays

    IMAP-Prinzip mit TR-FRET-Auslesung: Die Bindungslösung wird nach der Phosphodiesterasereaktion mit einem fluoreszent markierten Substrat hinzugefügt. In diesem System ist der Nanopartikel mit einem Terbium-(Tb)-Donator-Molekül gespickt. Durch Bindung an die gespickten M(III)-basierten Nanopartikel gerät das phosphorylierte fluoreszente Substrat in nächste Nähe des Tb-Donators, was die Messung des TR-FRET zwischen dem Tb-Donator und dem phosphorylierten fluoreszenten Substrat ermöglicht.

Bestellmöglichkeiten für die Enzym – IMAP Assays

IMAP Assay Kit

IMAP Evaluations-Demo-Kit

IMAP Evaluations-Demo-Kit
Ein optimiertes IMAP-Kit mit 800 Datenpunkten, das Kalibratoren (phosphorylierte und nicht phosphorylierte Peptide) zur Ausführung einer Kalibrierungskurve für die FP- oder TR-FRET-Detektion beinhaltet

#R8166

$730.00 USD

1

IMAP TR-FRET Evaluation Kit (with Progressive Binding System)

IMAP TR-FRET-Evaluations-Kit mit progressivem Bindungssystem
Ein optimiertes Protokoll mit 800 Datenpunkten zur IMAP-Ausführung mit dem progressivem Bindungssystem; Es sind zusätzliche Kinasen und Substrate erforderlich

#R8161

$730.00 USD

1

IMAP FR PDE Evaluation Kit

IMAP FP-PDE-Evaluations-Kits

#R8175

$1,338.00 USD

1

IMAP TR-FRET PDE Evaluation Kit (with cAMP and cGMP substrates)

IMAP TR-FRET-PDE-Evaluations-Kits
Beinhalten optimierte Protokolle sowie cAMP- und cGMP-Substrate; der Kunde stellt sein eigenes PDE-Enzym bereit

#R8176

$1,338.00 USD

1

Ressourcen für die Enzym – IMAP Assays

Kompatible Produkte und Service für die Enzym - IMAP Assays

Ausgewählte Anwendungen

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Wir sind bereit, Ihnen bei der Lösung schwieriger Herausforderungen in Ihrer Forschung zu helfen. Unsere bewährten Lösungen und hochqualifizierten Teams auf der ganzen Welt helfen Ihnen, Ihre nächste große Entdeckung voranzutreiben.

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