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Überblick über die Enzym – IMAP Assays

Basierend auf der spezifischen, hochaffinen Wechselwirkung mit dreiwertigen metallhaltigen Nanopartikeln (Perlen) ist IMAP eine generische, nicht-Antikörper-basierte Plattform zur Beurteilung der Kinase-, Phosphatase- und Phosphodiesterase-Aktivität Eine Enzymreaktion wird mit einem fluoreszent-markierten Substrat ausgelöst. Die Zugabe des IMAP-Bindungssystems stoppt die Enzymreaktion und initiiert die Bindung der Kügelchen an phosphorylierte Substrate. Die Bindung des Substrats an die Kügelchen, die mit der Enzymaktivität korreliert, kann entweder mit einer FP- oder mit einer TR-FRET-Auslesung erkannt werden.

Progressives IMAP-Bindungssystem

IMAP-Substrate

Daten aus IMAP-Assays

  • Probedaten aus IMAP: ROCKII Verdünnungskurve

    Probedaten aus IMAP FP: ROCKII Verdünnungskurve

    Enzymverdünnungskurven für ROCKII in BSA und im Tween IMAP Reaktionspuffer bei Verwendung des progressiven Bindungssystems. Reaktionsbedingungen: ROCKII Kinase (Upstate: 14–451) wie angezeigt, 100 nm aus FAM-S6 gewonnenes Substrat (5FAM-AKRRRLSSLRA-COOH, R7184), 100 µm ATP. IMAP-Bindungslösungsbedingungen: 100 % Bindungspuffer A, progressives Bindungsreagenz 1:400.

  • FP-Detektion im Vergleich mit TR-FRET-Detektion

    Akt-Inhibition mit Staurosporin: Vergleich zwischen IMAP TR-FRET- (oben) und IMAP FP-Detektion (unten). Reaktionsbedingungen: Akt-Kinase (0,1 U/ml, Upstate: 14–276), 300 nm, 1 µm, 3 µm FAM-Crosstide (5FAM-GRPRTSSFAEG-COOH, R7110), 10 µm ATP, Staurosporin wie angezeigt. IMAP-Bindungslösung: 40 % Bindungspuffer A, 60 % Bindungspuffer B, progressives Bindungsreagenz 1:400.

    FP- vs. TR-FRET-Detektion

Technologie der Enzym – IMAP Assays

  • Generische IMAP FP-Kinase- und -Phosphatase-Assays

    IMAP FP generische Kinase- und Phosphatase-Assays

    IMAP-Prinzip mit FP-Auslesung: Die Bindungslösung wird nach der Kinasereaktion mit einem fluoreszent markierten Peptid hinzugefügt. Das kleine, phosphorylierte, fluoreszente Substrat bindet sich an die großen, M(III)-basierten Nanopartikel, was die Rotationsgeschwindigkeit des Substrats reduziert und so dessen Polarisation steigert.

    Generische IMAP FP-Phosphodiesterase-Assays

    IMAP FP generische Phosphodiesterase-Assays

    IMAP-Prinzip mit FP-Auslesung: Die Bindungslösung wird nach der Phosphodiesterasereaktion mit einem fluoreszent markierten Substrat hinzugefügt. Das kleine, phosphorylierte, fluoreszente Substrat bindet sich an die großen, M(III)-basierten Nanopartikel, was die Rotationsgeschwindigkeit des Substrats reduziert und so dessen Polarisation steigert.

  • Generische IMAP TR-FRET-Kinase- und -Phosphatase-Assays

    IMAP TR-FRET generische Kinase- und Phosphatase-Assays

    IMAP-Prinzip mit TR-FRET-Auslesung: Die Bindungslösung wird nach der Kinasereaktion mit einem fluoreszent markierten Peptid oder Protein hinzugefügt. In diesem System ist der Nanopartikel mit einem Terbium-(Tb)-Donator-Molekül gespickt. Durch Bindung an die gespickten M(III)-basierten Nanopartikel gerät das phosphorylierte fluoreszente Substrat in nächste Nähe des Tb-Donators, was die Messung des TR-FRET zwischen dem Tb-Donator und dem phosphorylierten fluoreszenten Substrat ermöglicht.

    Generische IMAP TR-FRET-Phosphodiesterase-Assays

    IMAP TR-FRET generische Phosphodiesterase-Assays

    IMAP-Prinzip mit TR-FRET-Auslesung: Die Bindungslösung wird nach der Phosphodiesterasereaktion mit einem fluoreszent markierten Substrat hinzugefügt. In diesem System ist der Nanopartikel mit einem Terbium-(Tb)-Donator-Molekül gespickt. Durch Bindung an die gespickten M(III)-basierten Nanopartikel gerät das phosphorylierte fluoreszente Substrat in nächste Nähe des Tb-Donators, was die Messung des TR-FRET zwischen dem Tb-Donator und dem phosphorylierten fluoreszenten Substrat ermöglicht.

Bestellmöglichkeiten für die Enzym – IMAP Assays

IMAP Assay Kit

IMAP Evaluations-Demo-Kit - PN: R8166

IMAP Evaluation Demo Kit
Optimiertes IMAP-Kit mit 800 Datenpunkten, das Kalibratoren (phosphorylierte und nicht phosphorylierte Peptide) zur Ausführung einer Kalibrierungskurve für die FP- oder TR-FRET-Detektion beinhaltet

#R8166

$756.00 USD

1

IMAP TR-FRET Evaluation Kit (with Progressive Binding System) - PN: R8161

IMAP TR-FRET Evaluation Kit with Progressive Binding System
Optimiertes Protokoll mit 800 Datenpunkten zur IMAP-Ausführung mit dem progressivem Bindungssystem; es sind zusätzliche Kinasen und Substrate erforderlich

#R8161

$756.00 USD

1

IMAP FR PDE Evaluation Kit - PN: R8175

IMAP FP-PDE-Evaluations-Kits

#R8175

$1,385.00 USD

1

IMAP TR-FRET PDE Evaluation Kit (with cAMP and cGMP substrates) - PN: R8176

IMAP TR-FRET PDE Evaluation Kit
Beinhaltet optimierte Protokolle sowie cAMP- und cGMP-Substrate; der Kunde stellt sein eigenes PDE-Enzym bereit

#R8176

$1,385.00 USD

1

Ressourcen für die Enzym – IMAP Assays

Kompatible Produkte und Service für die Enzym - IMAP Assays

Ausgewählte Anwendungen